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蛋白提取過程
日期：2025-01-07 03:41
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摘要：
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1、 細胞樣品在提取前需要使用PBS清洗兩遍，以減少培養(yǎng)基對樣品的干擾，懸浮細胞可500Xg低速離心后收集進行蛋白提取。貼壁細胞可在培養(yǎng)器皿中直接進行蛋白提取。蛋白提取前建議進行細胞計數(shù)，以確定提取中添加裂解液的比例，得到很佳提取效率。
2、 組織樣品在提取前也需要用PBS清洗，一些含血量豐富的組織，建議使用紅細胞裂解液去除紅細胞，以避免血液中IgG對后續(xù)實驗的影響。
3、為了防止蛋白降解、去磷酸化，各種蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑都是必須的。
4、 在提取蛋白的...
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1、 細胞樣品在提取前需要使用PBS清洗兩遍，以減少培養(yǎng)基對樣品的干擾，懸浮細胞可500Xg低速離心后收集進行蛋白提取。貼壁細胞可在培養(yǎng)器皿中直接進行蛋白提取。蛋白提取前建議進行細胞計數(shù)，以確定提取中添加裂解液的比例，得到很佳提取效率。
2、 組織樣品在提取前也需要用PBS清洗，一些含血量豐富的組織，建議使用紅細胞裂解液去除紅細胞，以避免血液中IgG對后續(xù)實驗的影響。
3、為了防止蛋白降解、去磷酸化，各種蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑都是必須的。
4、 在提取蛋白的時候僅僅靠裂解液有時候也不能達到完全抽提的效果，有條件的話，可以對抽提懸液進行超聲破碎處理；超聲的時候，因為超聲發(fā)熱損傷蛋白，需要把要超聲的樣本放到冰水混合物里。
5、此外如果沒有裂解buffer，可以用1×SDSloading buffer代替來抽提蛋白，其效果類似于SDS裂解液，不過抽提后的樣本不能進行濃度測定。
6、 蛋白煮沸變性一般是95-100°C，5-10min，水浴鍋煮沸時，可用帶夾EP管防止EP管蓋彈開，使水浴鍋內(nèi)的水進入而使樣品廢掉。